Phương pháp xác định carbohydrate tổng số (Phenol-Sulfuric Acid Method)

Trong số các phương pháp xác định carbohydrate tổng số, phương pháp phenol-sulfuric acid được áp dụng rộng rãi do đơn giản và cho độ tin cậy cao. Bằng kinh nghiệm phân tích thực tế bởi chính FoSciTech, bài viết này sẽ cung cấp đến bạn đọc phương pháp phenol-sulfuric chi tiết, rõ ràng từng bước và giúp tránh những sai lầm đáng tiếc trong quá trình làm có thể dẫn đến sai số, nguy hiểm.

Quan trọng: Phương pháp phenol-sulfuric acid phát hiện hầu như tất cả các loại carbohydrate, bao gồm mono-, di-, oligo- và polysaccharides. Tuy nhiên cần lưu ý rằng khả năng hấp thụ của các loại carbohydrate khác nhau là khác nhau. Đối với các sản phẩm chứa nhiều xylose (một đường pentose), chẳng hạn như cám lúa mì hoặc cám ngô, nên sử dụng xylose để xây dựng đường chuẩn và đo độ hấp thụ ở bước sóng 480 nm. Đối với các sản phẩm chứa nhiều đường hexose (ví dụ: tinh bột), người ta thường sử dụng glucose để xây dựng đường chuẩn, và độ hấp thụ được đo ở bước sóng 490 nm.

1. Nguyên tắc phương pháp Phenol-Sulfuric acid

Trong môi trường axit mạnh và nóng, thành phần oligosaccharide và polysaccharide bị thủy phân, giải phóng monosaccharide (glucose). Tiếp đó, chúng bị khử nước và tạo các dẫn xuất furan. Kết quả thu được sản phẩm có màu vàng cam với phenol và độ hấp thụ cực đại ở bước sóng 490nm.

2. Ưu điểm của phương pháp Phenol-Sulfuric acid xác định carbohydrate tổng số

• Đơn giản, nhanh chóng, độ nhạy cao, chính xác và được áp dụng rộng rãi.
• Áp dụng xác định đường tổng cho hầu hết các loại đường, bao gồm dẫn xuất đường, oligo- và polysaccharide.
• Hóa chất rẻ, dễ kiếm và ổn định.
• Tạo màu sắc ổn định.
• Trong điều kiện thích hợp, phương pháp phenol – sulfuric axit chính xác đến ± 2%.

3. Chi tiết quy trình tiến hành xác định carbohydrate tổng

3.1. Hóa chất cần chuẩn bị

• Glucose chuẩn
• Phenol 5%
• Axit H₂SO₄ đặc, nóng

3.2. Lập đường chuẩn glucose xác định hàm lượng carbohydrate tổng

• Chuẩn bị dung dịch Glucose chuẩn 100µg/ml (dung dich G)
• Chuẩn bị các mẫu phản ứng:

• Mẫu trắng (Blank): Thay 1 ml hỗn hợp dung dịch G và nước cất bằng 1 ml nước cất
• Đợi phản ứng trong vòng 20 phút
• Đo độ hấp thụ quang (ABS: Absorbance) hay mật độ quang OD (Optical Density) ở bước sóng 490 nm.
• Thiết lập đường chuẩn biểu diễn sự phụ thuộc của hàm lượng Glucose và độ hấp thụ quang.

Ví dụ: Đường chuẩn xác định hàm lượng carbohydrate tổng được thực hiện bởi FoSciTech.

Đọc thêm bài viết: Phương pháp xác định độ cồn (Determination of ethanol concentration)

3.3. Quy trình xác định hàm lượng carbohydrate tổng bằng phương pháp Phenol – Sulfuric acid

• Dùng pipet chuyển 1ml mẫu (trong suốt) vào ống nghiệm, một mẫu trắng (nước cất) cũng được chuẩn bị.
• Thêm 1ml phenol 5% vào hỗn hợp mẫu
• Thêm nhanh 5ml axit sulfuric đậm đặc (khi thêm axit H₂SO₄ vào nước sinh ra lượng nhiệt lớn). Sản phẩm phản ứng có màu vàng cam
• Lắc đều mẫu
• Đợi phản ứng trong vòng 20 phút
• Đo độ hấp thụ ở bước sóng 490 nm
• Tham chiếu đường chuẩn đã lập sẽ tính toán được hàm lượng carbohydrate tổng

4. Lưu ý quan trọng khi tiến hành phân tích xác định carbohydrate tổng

• Tất cả mẫu phải được pha loãng tới nồng độ nằm trong khoảng nồng độ xây dựng chuẩn.
• Mẫu đem phản ứng ở dạng dịch trong suốt
• Nếu mẫu không ở dạng dung dịch, cần thực hiện xử lý mẫu về dạng dịch trong trước khi tiến hành phân tích.
• Sử dụng cùng thiết bị đo và hóa chất cho quá trình lập đường chuẩn và xác định hàm lượng carbohydrate tổng trong mẫu.

KẾT LUẬN

Phương pháp Phenol-Sulfuric acid là phương pháp xác định carbohydrate tổng được áp dụng rộng rãi vì tính đơn giản, nhanh chóng và cho độ chính xác cao. Áp dụng phương pháp cho quá trình phân tích hàm lượng carbohydrate tổng sẽ mang lại lợi ích về chi phí và thời gian cho doanh nghiệp và người nghiên cứu.

CÁC CÂU HỎI THƯỜNG GẶP (FAQS)