Định lượng glucose bằng bộ phân tích GOPOD (D-Glucose Assay Kit)

GOPOD kit là một công cụ mạnh mẽ cho khả năng định lượng glucose với độ chính xác rất cao. Do glucose xuất hiện trong tự nhiên là D-glucose, trong khi đó L-glucose được sản xuất tổng hợp với số lượng tương đối nhỏ và có tầm quan trọng thấp hơn nên thuật ngữ glucose được nhắc đến trong toàn bộ bài viết này mang nghĩa là D-glucose.

Bộ phân tích D-Glucose của nhà sản xuất Megazyme (glucose oxidase/ peroxidase; GOPOD) sử dụng enzyme glucose oxidase và peroxidase có độ tinh khiết cao, được sử dụng để định lượng D-glucose trong dịch chiết nguyên liệu thực vật hoặc thực phẩm. Màu sắc tạo thành ổn định ở nhiệt độ phòng ít nhất hai giờ sau phản ứng.

1. Nguyên tắc định lượng glucose bằng kit GOPOD

D-glucose trong dịch chiết nguyên liệu thực vật thường xuất hiện cùng maltose, maltosaccharides, tinh bột, sucrose và/ hoặc glucooligosaccharides liên kết β.
Do đó, thuốc thử phân tích yêu cầu bắt buộc phải có độ tinh khiết cao. Về cơ bản, thuốc thử không được chứa các enzyme thủy phân tinh bột, enzyme phân giải saccarose và β-glucosidase, vì chúng có thể dẫn tới kết quả định lượng glucose tự do cao hoặc thấp hơn hàm lượng thực tế có trong dịch phân tích.

Với độ chính xác cao, bộ phân tích GOPOD là một công cụ hữu hiệu cho các nhà nghiên cứu khi cần phân tích hàm lượng D-Glucose trong các sản phẩm thực phẩm.

Các phản ứng xảy ra bao gồm:

2. Cách chuẩn bị thuốc thử định lượng glucose

Thành phần bộ kit GOPOD định lượng glucose

Lọ 1: (x 2) GOPOD Reagent Buffer (Bottle 1)
Dung dịch đệm (50 mL, pH 7.4), p-hydroxybenzoic acid và sodium azide (0.095% w/v). Thời gian ổn định > 4 năm ở điều kiện 4°C.
Lọ 2: (x 2) GOPOD Reagent Enzymes (Bottle 2)
Glucose oxidase, peroxidase và 4-aminoantipyrine. Thời gian ổn định > 5 năm ở điều kiện dưới -10°C
Lọ 3: D-Glucose standard (Bottle 3)
Dung dịch D-Glucose chuẩn (5 mL, 1 mg/mL) trong 0,2% (w/v) benzoic acid. Thời gian ổn định hơn 5 năm ở nhiệt độ phòng

Chi tiết cách pha thuốc thử GOPOD

Bước 1: Pha loãng dung dịch đệm trong lọ 1 (GOPOD Reagent Buffer – bottle 1) bằng nước cất tới thể tích 1 L. Thu được dung dịch I. Sử dụng ngay sau khi pha loãng.

Bước 2: Hòa tan thành phần lọ 2 vào khoảng 20 mL dung dịch I, sau đó chuyển vào phần còn lại vào bình chứa sẵn dung dịch I. Dùng giấy bạc bao quanh lọ để bảo vệ thuốc thử khỏi ánh sáng.

Đây là Thuốc thử xác định Glucose – GOPOD (Glucose Determination Reagent – GOPOD Reagent).

Đọc thêm bài viết:
Định lượng đường khử bằng phương pháp DNS
Định lượng đường khử bằng phương pháp Bertrand

Lưu ý quan trọng khi chuẩn bị thuốc thử

• Trong dung dịch đệm đậm đặc, các tinh thể muối có thể hình thành khi bảo quản. Các tinh thể này phải được hòa tan hoàn toàn khi pha loãng dung dịch đệm.
• Dung dịch đệm chứa 0,095% (w/v) sodium azide.
  Đây là một hóa chất độc, cần chú ý khi thực hiện thí nghiệm.

Khi bảo quản thuốc thử:

• Thuốc thử ổn định trong ~ 3 tháng ở 2-5°C hoặc > 12 tháng dưới -10°C
• Nếu thuốc thử bảo quản đông lạnh, thì nên chia thành các phần nhỏ. Không đông lạnh/ rã đông nhiều hơn một lần.
• Thuốc thử mới pha xong có màu vàng nhạt hoặc hồng nhạt. Nó có thể bị chuyển thành màu hồng đậm hơn trong 2-3 tháng ở 4°C. Độ hấp thụ của dung dịch này nên nhỏ hơn 0,05 khi đọc so với nước cất.

3. Cách tiến hành định lượng glucose bằng thuốc thử GOPOD

Thêm 3,0 mL thuốc thử GOPOD vào 0,1 mL dung dịch mẫu chứa D-glucose và ổn nhiệt ở 40-50°C trong vòng 20 phút. Mẫu chuẩn D-Glucose và mẫu trắng (Blank) được chuẩn bị song song.

Đo độ hấp thụ ở bước sóng 510 nm so với mẫu trắng.

4. Tính toán kết quả

Hàm lượng D-Glucose trong mẫu được tính toán theo công thức:

5. CÁC CÂU HỎI THƯỜNG GẶP (FAQS)