GOPOD kit là một công cụ mạnh mẽ cho khả năng định lượng glucose với độ chính xác rất cao. Do glucose xuất hiện trong tự nhiên là D-glucose, trong khi đó L-glucose được sản xuất tổng hợp với số lượng tương đối nhỏ và có tầm quan trọng thấp hơn nên thuật ngữ glucose được nhắc đến trong toàn bộ bài viết này mang nghĩa là D-glucose.

Bộ phân tích D-Glucose của nhà sản xuất Megazyme (glucose oxidase/ peroxidase; GOPOD) sử dụng enzyme glucose oxidase và peroxidase có độ tinh khiết cao, được sử dụng để định lượng D-glucose trong dịch chiết nguyên liệu thực vật hoặc thực phẩm. Màu sắc tạo thành ổn định ở nhiệt độ phòng ít nhất hai giờ sau phản ứng.

D-Glucose Assay Kit GOPOD Format

1. Nguyên tắc định lượng glucose bằng kit GOPOD

D-glucose trong dịch chiết nguyên liệu thực vật thường xuất hiện cùng maltose, maltosaccharides, tinh bột, sucrose và/ hoặc glucooligosaccharides liên kết β.
Do đó, thuốc thử phân tích yêu cầu bắt buộc phải có độ tinh khiết cao. Về cơ bản, thuốc thử không được chứa các enzyme thủy phân tinh bột, enzyme phân giải saccarose và β-glucosidase, vì chúng có thể dẫn tới kết quả định lượng glucose tự do cao hoặc thấp hơn hàm lượng thực tế có trong dịch phân tích.

Với độ chính xác cao, bộ phân tích GOPOD là một công cụ hữu hiệu cho các nhà nghiên cứu khi cần phân tích hàm lượng D-Glucose trong các sản phẩm thực phẩm.

Các phản ứng xảy ra bao gồm:

Định lượng D-Glucose bằng GOPOD

2. Cách chuẩn bị thuốc thử định lượng glucose

Thành phần bộ kit GOPOD định lượng glucose

Lọ 1: (x 2) GOPOD Reagent Buffer (Bottle 1)
Dung dịch đệm (50 mL, pH 7.4), p-hydroxybenzoic acid và sodium azide (0.095% w/v). Thời gian ổn định > 4 năm ở điều kiện 4°C.
Lọ 2: (x 2) GOPOD Reagent Enzymes (Bottle 2)
Glucose oxidase, peroxidase và 4-aminoantipyrine. Thời gian ổn định > 5 năm ở điều kiện dưới -10°C
Lọ 3: D-Glucose standard (Bottle 3)
Dung dịch D-Glucose chuẩn (5 mL, 1 mg/mL) trong 0,2% (w/v) benzoic acid. Thời gian ổn định hơn 5 năm ở nhiệt độ phòng

Chi tiết cách pha thuốc thử GOPOD

Bước 1: Pha loãng dung dịch đệm trong lọ 1 (GOPOD Reagent Buffer – bottle 1) bằng nước cất tới thể tích 1 L. Thu được dung dịch I. Sử dụng ngay sau khi pha loãng.

Bước 2: Hòa tan thành phần lọ 2 vào khoảng 20 mL dung dịch I, sau đó chuyển vào phần còn lại vào bình chứa sẵn dung dịch I. Dùng giấy bạc bao quanh lọ để bảo vệ thuốc thử khỏi ánh sáng.

Đây là Thuốc thử xác định Glucose – GOPOD (Glucose Determination Reagent – GOPOD Reagent).

Đọc thêm bài viết:
Định lượng đường khử bằng phương pháp DNS
Định lượng đường khử bằng phương pháp Bertrand

Lưu ý quan trọng khi chuẩn bị thuốc thử

  • Trong dung dịch đệm đậm đặc, các tinh thể muối có thể hình thành khi bảo quản. Các tinh thể này phải được hòa tan hoàn toàn khi pha loãng dung dịch đệm.
  • Dung dịch đệm chứa 0,095% (w/v) sodium azide.
    Đây là một hóa chất độc, cần chú ý khi thực hiện thí nghiệm.

Khi bảo quản thuốc thử:

  • Thuốc thử ổn định trong ~ 3 tháng ở 2-5°C hoặc > 12 tháng dưới -10°C
  • Nếu thuốc thử bảo quản đông lạnh, thì nên chia thành các phần nhỏ. Không đông lạnh/ rã đông nhiều hơn một lần.
  • Thuốc thử mới pha xong có màu vàng nhạt hoặc hồng nhạt. Nó có thể bị chuyển thành màu hồng đậm hơn trong 2-3 tháng ở 4°C. Độ hấp thụ của dung dịch này nên nhỏ hơn 0,05 khi đọc so với nước cất.

3. Cách tiến hành định lượng glucose bằng thuốc thử GOPOD

Thêm 3,0 mL thuốc thử GOPOD vào 0,1 mL dung dịch mẫu chứa D-glucose và ổn nhiệt ở 40-50°C trong vòng 20 phút. Mẫu chuẩn D-Glucose và mẫu trắng (Blank) được chuẩn bị song song.

Định lượng D-Glucose kit GOPOD

Đo độ hấp thụ ở bước sóng 510 nm so với mẫu trắng.

các phương pháp xác định đường khử

4. Tính toán kết quả

Hàm lượng D-Glucose trong mẫu được tính toán theo công thức:

Xác định hàm lượng đường khử

5. CÁC CÂU HỎI THƯỜNG GẶP (FAQS)

Khoảng tuyến tính của bộ phân tích glucose (GOPOD) là bao nhiêu?

Thí nghiệm được thiết lập đo từ 4 đến 100 microgam mỗi lần xét nghiệm. Nếu nồng độ glucose trong mẫu phân tích cao hơn giá trị này, mẫu phải được pha loãng trước khi cho phản ứng với thuốc thử GOPOD. Độ hấp thụ của mẫu phân tích không được vượt quá các giá trị độ hấp thụ của 100 μg glucose chuẩn.

Màu của hỗn hợp sau phản ứng có bền ở nhiệt độ phòng không? Phản ứng có tiếp tục không nếu không đo màu ngay sau 20 phút?

Phản ứng hoàn thành sau khoảng 15 phút và màu ổn định ở nhiệt độ 20-50°C trong ít nhất một giờ sau phản ứng.

Giới hạn phát hiện dưới của bộ phân tích D-Glucose (GOPOD) là bao nhiêu?

~ 1 μg trên tổng thể tích mẫu thí nghiệm đem phản ứng.

Có thể pha ít hơn 1 L thuốc thử GOPOD trong một lần chuẩn bị không?

Không thể. Các thành phần không được chia thành các thể tích nhỏ hơn. Thuốc thử nên chia thành các phần nhỏ phù hợp sau khi đã chuẩn bị.

Cần thiết phải chạy chuẩn glucose mỗi lần tiến hành thí nghiệm hay không?

Cần phải chạy chuẩn glucose với mỗi phép xác định.
Do cường độ phản ứng màu của thuốc thử GOPOD có thể thay đổi theo thời gian. Giá trị độ hấp thụ của chất chuẩn glucose được sử dụng trong tính toán, do đó nó rất quan trọng để thu được kết quả chính xác.

Có thể giảm thể tích thuốc thử khi sử dụng bộ phân tích Glucose (D-Glucose Assay Kit (GOPOD Format)) không?

Có thể giảm thể tích thuốc thử. Khi đó, nên giảm theo một tỷ lệ tất cả các thể tích sử dụng trong thí nghiệm: mẫu, đường chuẩn và thể tích thuốc thử GOPOD.
Lưu ý rằng giới hạn định lượng glucose sẽ bị giảm. Cụ thể, khi giảm thể tích thuốc thử GOPOD 3 lần xuống còn 1 mL, lượng Glucose có thể xác định là 33 μg.

Nguồn tham khảo
Tại Foscitech, chúng tôi nỗ lực cung cấp những kiến thức chuyên môn đáng tin cậy và bám sát thực tế nhất trong lĩnh vực khoa học và công nghệ thực phẩm. Chúng tôi sử dụng chính sách biên tập nội dung khắt khe để đảm bảo nội dung trên Foscitech là tốt nhất.

1. D-Glucose Assay Procedure (Gopod-Format). 2018. http://www.megazyme.com.
2. Sasaki T, Sotome I, Okadome H. In vitro starch digestibility and in vivo glucose response of gelatinized potato starch in the presence of non-starch polysaccharides. Starch/Staerke. 2015;67(5-6):415-423. doi: 10.1002/star.201400214.

Tham khảo bài viết vui lòng ghi rõ nguồn: https://foscitech.vn/dinh-luong-glucose-bang-bo-phan-tich-gopod-kit/

Leave a Reply

Your email address will not be published